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内源性内参,你应该了解更多

内参,即是在检测细胞内分子表达变化时选择的参照物,其在细胞内的表达相对恒定,在处理因素作用条件下不会发生表达改变的基因。

2022-01-20

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“你们的内参加入提取吗?”

“你说监控采样和提取,怎么做到的?”

“这个内参检测的是什么基因呀?”

……

自从伯杰带有内参的新冠检测试剂上市,关于内参的问题纷至沓来。那就让我们一起来看一看内参为何方神圣吧!


1

---什么是内参


内参,即是在检测细胞内分子表达变化时选择的参照物,其在细胞内的表达相对恒定,在处理因素作用条件下不会发生表达改变的基因。内参同样可以校正上样量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。
2

---什么是内源性内参


内源性参照基因,也就是管家基因(持家基因,house keeping gene)。

管家基因是一类始终保持着低水平的甲基化并且一直处于活性转录状态的基因,高度保守并且在大多数情况下持续表达。其表达水平受环境因素影响较小,而且是在个体各个生长阶段的大多数,或几乎全部组织中持续表达,或变化很小,因此常存在于生物细胞核的常染色质中。它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响,而不受其他机制调节。

管家基因维持细胞最低限度功能所不可少的基因, 如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。这类基因在所有类型的细胞中都进行表达,因为这些基因的产物对于维持细胞的基本结构和代谢功能是必不可少的。

3

---伯杰新冠检测试剂中的RNase P内参是什么


RNase P,即为核糖核酸酶P,是由一条长链非编码RNA和十个蛋白质亚基组成的核糖核蛋白质复合物,可作用于催化切割RNA。核糖核酸酶是人体内最重要的核酶之一,也是第一个被发现的蛋白质以外具有催化活性的生物大分子。
RNase P 作为人体的生理作用可以充分表现有机体的生命活动内部化学反应的有序性,核糖核蛋白复合体可以根据靶RNA设计的外部引导序列(EGS)能与靶RNA碱基互补结合,形成类似前体tRNA的二级结构,从而引导人类核糖核酸酶P对靶RNA进行特异切割。
4

---RNase P做内参有何优势


由于RNase P在人体各器官组织细胞中普遍存在,而且能够对人体来源样本的RNA核酸片段进行检测,同时也可以作为内标结合使用,并监测整个实验操作过程的准确性。
若荧光PCR平台所显示出的样本反应曲线和内标反应曲线均不起跳,则说明采集到的样本质量有可能出现问题(如咽拭子未刮到上皮细胞,采样失败)或因为实验操作不当(如保存、运输不当,核酸提取过程RNA降解等)而出现假阴性,这需要引起操作者的注意。而RNase P内参可以对样本的采集、运输储存、核酸提取等步骤起到监控的作用,保障了检测结果的准确性。

现在,你是否更了解内源性内参了呢?

不同于外源性内参需要在提取时额外加入,并仅能监控提取过程;内源性内参无需额外加入,我们设计了扩增RNase P的引物探针,只要采样、提取过程无问题,即可在ROX通道看到内参的扩增曲线。

是不是既简便、又巧妙的设计呢?



伯杰医疗

上海伯杰医疗科技有限公司是一家致力于感染性病原体分子诊断试剂研发和应用,深耕于多重荧光 PCR 诊断试剂和痕量病毒二代测序试剂及相关服务的高新技术企业。公司围绕感染性病原体这一主线,从诊断试剂、诊断仪器、测序服务和医检所服务等多个面提供全套解决方案。公司秉承“勇于创新,质量为先”的方针,为医疗机构、疾控公卫、高校科研等合作伙伴提供优质产品与服务。

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